أسئلة وأجوبة شائعة في تحضير محلول ثيوسيانات غوانيدين

غوانيدين ثيوسيانات هو مسبب قوي للبروتين. لا يمكن فقط إذابة البروتينات بسرعة ، مما يؤدي إلى تفتيت بنية الخلية ، وفصل البروتينات النووية بسرعة عن الأحماض النووية بسبب تدمير البنية الثانوية ، ولكن أيضًا له تأثير قوي على تمسخ البروتينات. لذلك ، يمكن استخدام ثيوسيانات الغوانيدين كمحول للخلايا ، وفصل الحمض النووي الريبي عن البروتين ، وإطلاق الحمض النووي الريبي في المحلول. ومع ذلك ، غالبًا ما يتم مواجهة بعض المشكلات في تحضير واستخدام محلول ثيوسيانات الغوانيدين. هذه الورقة سوف تجيب على هذه المشاكل واحدة تلو الأخرى.

هل يجب استخدام محلول ثيوسيانات الغوانيدين وتحضيره الآن؟

كان التركيز النهائي لثيوسيانات الغوانيدين 4 م كمثال: 42 مم سيترات الصوديوم ، 0.83٪ ن-لوريل ساركوزين (دوديسيل الصوديوم ، ن-ميثيل جليسين) ، 0.2 مم ²- تحضير محلول CSB من مركابتو إيثانول ؛ يتم خلط 25g guanidine thiocyanate و 33ml محلول CSB المؤقت حتى يذوب تمامًا. يمكن تحضير المحلول المشوه عن طريق التسخين والذوبان عند 65℃ وتخزينها في 4℃ في وضع الاستعداد.

لذلك ، ليس من الضروري استخدام محلول ثيوسيانات الغوانيدين وتحضيره الآن ، وهناك حلول لتركيزات مختلفة في السوق في الوقت الحالي ، ولكن ليس من السهل أن يكون وقت التخزين طويلاً للغاية ، وإلا سيكون هناك هطول ، وهو ما يجب أن يكون فحص بعناية قبل الاستخدام ؛ بالإضافة إلى ذلك ، إذا كان هناك الكثير من التحضير لمرة واحدة ، فمن المستحسن إعادة التعبئة.

هل يحتاج محلول غوانيدين ثيوسيانات إلى التعقيم بعد التحضير؟

ليس من الضروري تعقيم محلول ثيوسيانات الغوانيدين ، وهو غير مستقر للغاية ، ويستخدم 0.1 ٪ من ماء DEPC بشكل عام مع محلول الانحلال الحراري ، وقد تم تعقيم الماء. بالإضافة إلى ذلك ، يجب تحضير جميع الكواشف الخاصة باستخراج الحمض النووي الريبي بماء DEPC ، ويجب فتح الكاشف حديثًا واستخدامه حصريًا لـ RNA.

على الرغم من أن المحلول المحضر لا يحتاج إلى التعقيم ، إلا أنه يجب ملاحظة أن المنتجات البلاستيكية المستخدمة في التجربة قد تم تمييزها بأنها خالية من RNase. إذا لم يتم فتحها للاستخدام ، فيمكن استخدامها مباشرة. يجب معالجة البعض الآخر: أضف DEPC إلى الماء المقطر المزدوج لجعل تركيزه النهائي 0.1٪ ، وانقع المنتجات البلاستيكية فيه ، وقم بتهوية المطبخ طوال الليل ، ثم ختمها بورق الألمنيوم ، وتعقيم درجة الحرارة العالية والضغط العالي لمدة 30 دقيقة على الأقل ، الجافة والاستعداد.